序章

ビタミン B12 (コバラミン) は、細菌や古細菌によって生成される水溶性ビタミンです。それは、DNA合成、脂肪酸代謝、およびアミノ酸代謝のために代謝するすべてのヒト細胞によって使用されます。このビタミンは、中心にコバルトイオンを持つ修飾されたコリン環で構成されています。ビタミンB12が欠乏すると、疲労、貧血、神経障害を引き起こします。

目標

ビタミンB12（シアノコバラミン）

反応性

一般（全種）

テスト済みのアプリケーション

エリサ

推奨希釈率

最適な希釈/濃度はエンドユーザーが決定する必要があります。

保管所

4℃で出荷。キットを受け取ったら、キットのマニュアルの保管指示に従って保管してください。

有効

このキットの有効期限は 6 か月です。

安定

キットの安定性は、活性損失の速度によって決まります。適切な保管条件下では、有効期限内の損失率は 5% 未満です。パフォーマンスの変動を最小限に抑えるには、操作手順と実験室の条件を厳密に管理する必要があります。また、アッセイ全体を同じユーザーが実行することを強くお勧めします。

試験範囲

0.156 ng/ml – 10 ng/ml

標準形式

凍結乾燥

検出方法

比色分析

アッセイデータ

定量的

サンプルの種類

血清、血漿、組織ホモジネートおよびその他の体液。

分析原理

このキットは、サンドイッチ酵素結合免疫吸着アッセイ技術に基づいています。抗体は96ウェルプレートにプレコートされています。標準物質、試験サンプル、およびビオチン結合試薬がウェルに添加され、インキュベートされます。次に、HRP 結合試薬を添加し、プレート全体をインキュベートします。未結合のコンジュゲートは、各段階で洗浄バッファーを使用して除去されます。 TMB 基質は、HRP 酵素反応を定量するために使用されます。 TMB 基質を添加すると、十分なビタミン B12 を含むウェルのみが青色の生成物を生成し、酸性停止液を添加すると黄色に変わります。黄色の強度は、プレートに結合したビタミン B12 の量に比例します。光学密度 (OD) は、マイクロプレート リーダーで 450 nm で分光測光的に測定され、そこからビタミン B12 の濃度を計算できます。

キットのコンポーネント

記載されているキットのコンポーネントは参考用です。製品マニュアルとは若干異なる場合があります。製品は、製品に同梱および納品される製品マニュアルの記載に従って使用してください。

・プレコート96ウェルマイクロプレート

・ 標準

・標準希釈緩衝液

・ウォッシュバッファー

・検出試薬A

・検出試薬B

・希釈剤A

・希釈剤B

・TMB基板

・ストップソリューション

・プレートシーラー

必要な資料が提供されていない

・37℃インキュベーター

· マルチおよびシングルチャンネルピペットおよび滅菌ピペットチップ

・噴出ボトルまたは自動マイクロプレート洗浄機

・1.5mlチューブ

・ 蒸留水

・吸収濾紙

・100mlと1リットルのメスシリンダー

・マイクロプレートリーダー（波長：450nm）

・ELISAシェーカー

試薬の準備

この手順は参考のためにのみ提供されています。製品マニュアルとは若干異なる場合があります。製品は、製品に同梱および納品される製品マニュアルの記載に従って使用してください。

・1) 標準液：推奨量の標準希釈緩衝液を用いて標準液を調製し、標準液を調製します。次に、プロトコールの指示に従って、標準希釈バッファーを使用して標準溶液の段階希釈を実行します。

· 2) 洗浄バッファー: プロトコールの指示に従って、濃縮した洗浄バッファーを蒸留水で希釈します。

· 3) 検出試薬の調製: 必要な作業溶液の総量を計算します。検出試薬 A と検出試薬 B をそれぞれ希釈液 A と希釈液 B で 1:100 に希釈します。

アッセイ手順

この手順は参考のためにのみ提供されています。製品マニュアルとは若干異なる場合があります。製品は、製品に同梱および納品される製品マニュアルの記載に従って使用してください。

· 1) スタンダード、テストサンプル、コントロールウェルを設定します。

· 2) 希釈した標準液 100 μl を標準ウェルに分取します。

· 3) 標準希釈バッファー 100 μl をコントロール (ゼロ) ウェルに分注します。

・ 4) 希釈サンプル 100 μl をサンプルウェルに分取します。 37℃で1時間インキュベートします。

・5) 検出試薬 A 100 μl を各ウェルに分注します。 37℃で1時間インキュベートします。

・6) 3回洗います。

・ 7) 検出試薬 B 100 μl を各ウェルに分注します。 37℃で30分間インキュベートします。

・8) 5回洗います。

・９）ＴＭＢ基質９０μｌを各ウェルに分取する。 37℃で10〜20分間インキュベートします。

· 10) 停止液を 50 μl に分注します。

・１１）４５０ｎｍでＯＤを測定する。

プロトコル

この手順は参考のためにのみ提供されています。製品マニュアルとは若干異なる場合があります。製品は、製品に同梱および納品される製品マニュアルの記載に従って使用してください。

· 使用前にキットのコンポーネントとサンプルを室温 (18 ～ 25 °C) に平衡化してください。テストごとに標準曲線をプロットすることをお勧めします。

・1. プレコートプレート上に標準ウェル、試験サンプルウェル、コントロール（ゼロ）ウェルをそれぞれセットし、その位置を記録します。各標準およびサンプルを少なくとも 2 回測定することをお勧めします。

· 2. 各標準、コントロール、およびサンプルの 100 µL を適切なウェルに加えます。プレートをカバーで密閉し、37℃で 1 時間インキュベートします。

・3.カバーを外し、液を捨てます。

· 4. 100 μl の検出試薬 A 使用溶液を各ウェルに加えます。プレートをカバーで密閉し、37℃で 1 時間インキュベートします。

・5.カバーを外し、溶液を捨てます。プレートを 1X 洗浄バッファーで 3 回洗浄します。

· 6. 100 μL の検出試薬 B 作業溶液を各ウェルに加え、密閉し、37°C で 30 分間インキュベートします。

・ 7. 溶液を捨て、前のステップで説明したように洗浄緩衝液でプレートを 5 回洗浄します。

・ 8. 90 μl の TMB 基質を各ウェルに分注します。プレートをカバーで密閉し、37℃で10〜20分間インキュベートします。光への曝露を避けてください。インキュベーション時間は参考用です。最適な時間はエンドユーザーが決定する必要があります。 30 分を超えないようにしてください。

· 9. 各ウェルに 50 μL の停止液を加えます。 450nmですぐに読み取ります。

結果の計算

計算では、各参照標準および各サンプルの重複した OD450 測定値を平均し、平均コントロール (ゼロ) OD450 測定値を減算します。標準曲線は、各参照標準溶液の相対 OD450 (Y) 対各標準溶液のそれぞれの濃度 (X) としてプロットできます。サンプルのビタミン B12 濃度は標準曲線から補間できます。

可用性

5～12営業日以内に発送されます。

ノート

この製品は研究専用です。

範囲と感度は変更される場合があります。最新の製品情報についてはお問い合わせください。正確な結果を得るには、サンプル濃度をキットの中間濃度に希釈する必要があります。特定の範囲をご希望の場合は、事前にお問い合わせいただくか、ご注文のコメントにリクエストを記載してください。

当社の ELISA キットおよび CLIA キットは、組換えタンパク質ではなくネイティブサンプルの検出用に最適化されていることに注意してください。組換えタンパク質は天然タンパク質とは異なる配列や三次構造を持っている可能性があるため、当社ではその検出を保証できません。

でコーティングされたプレート

抗原