Введение

Витамин B12 (кобаламин) представляет собой водорастворимый витамин, вырабатываемый бактериями и археями. Он используется всеми метаболизирующими клетками человека для синтеза ДНК, метаболизма жирных кислот и метаболизма аминокислот. Витамин состоит из модифицированного корринового кольца с центральным ионом кобальта. Дефицит витамина В12 приводит к усталости, анемии и неврологическим расстройствам.

Цель

Витамин B12 (цианокобаламин)

Реактивность

Общие (все виды)

Протестированные приложения

ИФА

Рекомендуемые разведения

Оптимальные разведения/концентрации должны определяться конечным пользователем.

Хранилище

Поставляется при температуре 4 °C. После получения храните набор в соответствии с инструкциями по хранению в руководстве к набору.

Период действия

Срок действия данного комплекта 6 месяцев.

Стабильность

Стабильность набора определяется скоростью потери активности. Потери составляют менее 5% в течение срока годности при соответствующих условиях хранения. Чтобы свести к минимуму колебания производительности, необходимо строго контролировать рабочие процедуры и лабораторные условия. Также настоятельно рекомендуется, чтобы весь анализ выполнялся одним и тем же пользователем.

Диапазон испытаний

0,156 нг/мл – 10 нг/мл

Стандартная форма

лиофилизированный

Метод обнаружения

Колориметрический

Данные анализа

Количественный

Тип образца

Сыворотка, плазма, гомогенаты тканей и другие биологические жидкости.

Принцип анализа

Этот набор основан на технологии сэндвич-ферментного иммуноферментного анализа. Антитело предварительно наносят на 96-луночный планшет. Стандарты, тестовые образцы и реагент, конъюгированный с биотином, добавляют в лунки и инкубируют. Затем добавляют реагент, конъюгированный с HRP, и весь планшет инкубируют. Несвязавшиеся конъюгаты удаляют с помощью промывочного буфера на каждом этапе. Субстрат TMB используется для количественного определения ферментативной реакции HRP. После добавления субстрата TMB только лунки, содержащие достаточное количество витамина B12, будут давать продукт синего цвета, который затем меняется на желтый после добавления кислого стоп-раствора. Интенсивность желтого цвета пропорциональна количеству витамина B12, связанного на пластине. Оптическую плотность (OD) измеряют спектрофотометрически при 450 нм в устройстве для считывания микропланшетов, по которому можно рассчитать концентрацию витамина B12.

Компоненты комплекта

Перечисленные компоненты комплекта приведены только для справки. Руководство по продукту может незначительно отличаться. Изделие следует использовать в соответствии с инструкциями, прилагаемыми к изделию и поставляемыми вместе с ним.

· Предварительно покрытые 96-луночные микропланшеты

· Стандарт

· Стандартный разбавляющий буфер

· Промывочный буфер

· Реагент для обнаружения А

· Реагент обнаружения B

· Разбавитель А

· Разбавитель Б

· Субстрат ТМБ

· Стоп решение

· Уплотнитель пластин

Требуемый материал, но не предоставленный

· 37°C инкубатор

· Многоканальные и одноканальные пипетки и стерильные наконечники для пипеток

· Шприц-бутылка или автоматическая мойка для микропланшетов

· тюбики по 1,5 мл

· Дистиллированная вода

· Абсорбирующая фильтровальная бумага

· Градуированные цилиндры 100 мл и 1 литр

· Считыватель микропланшетов (длина волны: 450 нм)

· Шейкер ИФА

Подготовка реагентов

Эта процедура предоставляется только для справки. Руководство по продукту может незначительно отличаться. Изделие следует использовать в соответствии с инструкциями, прилагаемыми к изделию и поставляемыми вместе с ним.

· 1) Стандарт: Приготовьте стандарт с рекомендуемым объемом буфера для разбавления стандарта, чтобы приготовить стандартный раствор. Затем используйте буфер Standard Diluent для проведения серийных разведений стандартного раствора, как указано в протоколе.

· 2) Промывочный буфер: Разбавьте концентрированный промывочный буфер дистиллированной водой, как указано в протоколе.

· 3) Приготовление реагента для обнаружения: Рассчитайте общий объем необходимого рабочего раствора. Разбавьте реагент для обнаружения A и реагент для обнаружения B с разбавителем A и разбавителем B, соответственно, в соотношении 1:100.

Процедура анализа

Эта процедура предоставляется только для справки. Руководство по продукту может незначительно отличаться. Изделие следует использовать в соответствии с инструкциями, прилагаемыми к изделию и поставляемыми вместе с ним.

· 1) Установить стандарт, тестовые образцы и контрольные лунки.

· 2) Аликвоты по 100 мкл разбавленного стандарта в стандартные лунки.

· 3) Аликвоту 100 мкл буфера Standard Diluent в контрольную (нулевую) лунку.

· 4) Аликвоты по 100 мкл разбавленных образцов в лунки для образцов. Инкубировать в течение 1 часа при 37 ° C.

· 5) Аликвоты по 100 мкл реагента для детекции А в каждую лунку. Инкубировать в течение 1 часа при 37 ° C.

· 6) Стирать 3 раза.

· 7) Аликвоты по 100 мкл Реагента для обнаружения B в каждую лунку. Инкубируйте в течение 30 минут при 37 ° C.

· 8) Промыть 5 раз.

· 9) Аликвоты по 90 мкл субстрата TMB в каждую лунку. Инкубировать в течение 10-20 минут при 37 ° C.

· 10) Аликвоту 50 мкл стоп-раствора.

· 11) Измерьте ОП при 450 нм.

Протокол

Эта процедура предоставляется только для справки. Руководство по продукту может незначительно отличаться. Изделие следует использовать в соответствии с инструкциями, прилагаемыми к изделию и поставляемыми вместе с ним.

· Перед использованием доведите компоненты набора и образцы до комнатной температуры (18–25 °C). Рекомендуется построить стандартную кривую для каждого теста.

· 1. Поместите лунки со стандартом, тестовым образцом и контрольным (нулевым) на планшет с предварительно нанесенным покрытием соответственно, а затем запишите их положения. Рекомендуется измерять каждый стандарт и образец как минимум в двух экземплярах.

· 2. Добавьте по 100 мкл каждого стандарта, контроля и образца в соответствующие лунки. Закройте планшет крышкой и инкубируйте в течение 1 ч при 37°С.

· 3. Снимите крышку и слейте жидкость.

· 4. Добавьте в каждую лунку по 100 мкл рабочего раствора детектирующего реагента А. Закройте планшет крышкой и инкубируйте в течение 1 ч при 37°С.

· 5. Снимите крышку и выбросьте раствор. Промойте планшет 3 раза промывочным буфером 1X.

· 6. Добавьте по 100 мкл рабочего раствора детектирующего реагента В в каждую лунку, закройте и инкубируйте при 37°C в течение 30 мин.

· 7. Слейте раствор и промойте планшет 5 раз промывочным буфером, как описано в предыдущем шаге.

· 8. Внесите аликвоты по 90 мкл субстрата ТМБ в каждую лунку. Закройте планшет крышкой и инкубируйте при 37°С в течение 10–20 мин. Избегайте воздействия света. Время инкубации предназначено только для справки, оптимальное время должно определяться конечным пользователем. Не превышать 30 мин.

· 9. Добавьте в каждую лунку по 50 мкл стоп-раствора. Немедленно считывайте при 450 нм.

Расчет результатов

Для расчета усредните дублированные показания OD450 для каждого эталонного стандарта и каждого образца и вычтите среднее контрольное (нулевое) показание OD450. Стандартную кривую можно построить как относительную OD450 каждого эталонного стандартного раствора (Y) в зависимости от соответствующей концентрации каждого стандартного раствора (X). Концентрация витамина B12 в образцах может быть интерполирована из стандартной кривой.

Доступность

Отправка в течение 5-12 рабочих дней.

Примечание

Этот продукт предназначен только для исследовательских целей.

Диапазон и чувствительность могут быть изменены. Пожалуйста, свяжитесь с нами для получения последней информации о продукте. Для получения точных результатов концентрации пробы должны быть разбавлены до средней концентрации набора. Если вам требуется определенный ассортимент, пожалуйста, свяжитесь с нами заранее или напишите свой запрос в комментарии к заказу.

Обратите внимание, что наши наборы ELISA и CLIA оптимизированы для обнаружения нативных образцов, а не рекомбинантных белков. Мы не можем гарантировать обнаружение рекомбинантных белков, поскольку они могут иметь другую последовательность или третичную структуру по сравнению с нативным белком.

Пластина с покрытием

Антиген