Introducción

La vitamina B12 (cobalamina) es una vitamina soluble en agua producida por bacterias y arqueas. Es utilizado por todas las células humanas metabolizadoras para la síntesis de ADN, el metabolismo de los ácidos grasos y el metabolismo de los aminoácidos. La vitamina consiste en un anillo de corrina modificado con un ión central de cobalto. La deficiencia de vitamina B12 provoca fatiga, anemia y trastornos neurológicos.

Objetivo

Vitamina B12 (Cianocobalamina)

Reactividad

General (todas las especies)

Aplicaciones probadas

ELISA

Diluciones recomendadas

El usuario final debe determinar las diluciones/concentraciones óptimas.

Almacenamiento

Enviado a 4 °C. Al recibirlo, guarde el kit de acuerdo con las instrucciones de almacenamiento del manual del kit.

Validez

La validez de este kit es de 6 meses.

Estabilidad

La estabilidad del kit está determinada por la tasa de pérdida de actividad. La tasa de pérdida es inferior a 5% dentro de la fecha de caducidad en condiciones de almacenamiento adecuadas. Para minimizar las fluctuaciones de rendimiento, los procedimientos de operación y las condiciones de laboratorio deben controlarse estrictamente. También se recomienda encarecidamente que el mismo usuario realice todo el ensayo.

Rango de prueba

0,156 ng/ml – 10 ng/ml

Forma estándar

liofilizado

Método de detección

colorimétrico

Datos de ensayo

Cuantitativo

Tipo de ejemplo

Suero, plasma, homogeneizados de tejido y otros fluidos biológicos.

Principio de ensayo

Este kit se basa en la tecnología de ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas tipo sándwich. Se recubre previamente un anticuerpo en una placa de 96 pocillos. Los estándares, las muestras de prueba y el reactivo conjugado con biotina se agregan a los pocillos y se incuban. Luego se agrega el reactivo conjugado con HRP y se incuba toda la placa. Los conjugados no unidos se eliminan utilizando tampón de lavado en cada etapa. El sustrato TMB se utiliza para cuantificar la reacción enzimática de HRP. Después de agregar el sustrato TMB, solo los pozos que contienen suficiente vitamina B12 producirán un producto de color azul, que luego cambia a amarillo después de agregar la solución de parada ácida. La intensidad del color amarillo es proporcional a la cantidad de vitamina B12 ligada a la placa. La Densidad Óptica (DO) se mide espectrofotométricamente a 450 nm en un lector de microplacas, a partir del cual se puede calcular la concentración de Vitamina B12.

Componentes del equipo

Los componentes del kit enumerados son solo para referencia. El manual del producto puede diferir ligeramente. El producto debe usarse como se indica en el manual del producto incluido y entregado junto con el producto.

· Microplaca de 96 pocillos prerrevestida

· Estándar

· Tampón diluyente estándar

· Tampón de lavado

· Reactivo de detección A

· Reactivo de detección B

· Diluyente A

· Diluyente B

· Sustrato TMB

· Solución de parada

· Sellador de Placas

Material requerido pero no provisto

· Incubadora a 37°C

· Pipetas multicanal y monocanal y puntas de pipeta estériles

· Lavador automático de microplacas o botella rociadora

· Tubos de 1,5ml

· Agua destilada

· Papeles de filtro absorbentes

· Probetas graduadas de 100 ml y 1 litro

· Lector de microplacas (longitud de onda: 450 nm)

· Agitador ELISA

Preparación de reactivos

Este procedimiento se proporciona solo como referencia. El manual del producto puede diferir ligeramente. El producto debe usarse como se indica en el manual del producto incluido y entregado junto con el producto.

· 1) Estándar: Preparar el estándar con el volumen recomendado de Tampón Diluyente Estándar, para hacer la solución estándar. Luego use el tampón de diluyente estándar para realizar diluciones en serie de la solución estándar, como se indica en el Protocolo.

· 2) Wash Buffer: Diluya el Wash Buffer concentrado con agua destilada, como se indica en el Protocolo.

· 3) Preparación del Reactivo de Detección: Calcular el volumen total de solución de trabajo requerido. Diluya el Reactivo de detección A y el Reactivo de detección B con Diluyente A y Diluyente B, respectivamente, a 1:100.

Procedimiento de ensayo

Este procedimiento se proporciona solo como referencia. El manual del producto puede diferir ligeramente. El producto debe usarse como se indica en el manual del producto incluido y entregado junto con el producto.

· 1) Establecimiento de patrones, muestras de prueba y pozos de control.

· 2) Alícuota de 100 µl de estándar diluido en los pocillos estándar.

· 3) Alícuota de 100 µl de tampón de diluyente estándar en el pocillo de control (cero).

· 4) Alícuota de 100 µl de muestras diluidas en los pocillos de muestra. Incubar durante 1 hora a 37 ° C.

· 5) Alícuota de 100 µl de Reactivo de Detección A a cada pocillo. Incubar durante 1 hora a 37 ° C.

· 6) Lavar 3 veces.

· 7) Alícuota de 100 µl de Reactivo de Detección B a cada pocillo. Incubar durante 30 min a 37 °C.

· 8) Lavar 5 veces.

· 9) Alícuota de 90 µl de Sustrato TMB a cada pocillo. Incubar durante 10-20 minutos a 37 °C.

· 10) Alícuota de 50 µl de Solución de Parada.

· 11) Medir la DO a 450 nm.

Protocolo

Este procedimiento se proporciona solo como referencia. El manual del producto puede diferir ligeramente. El producto debe usarse como se indica en el manual del producto incluido y entregado junto con el producto.

· Equilibre los componentes del kit y las muestras a temperatura ambiente (18 – 25 °C) antes de su uso. Se recomienda trazar una curva estándar para cada prueba.

· 1. Coloque los pocillos estándar, de muestra de prueba y de control (cero) en la placa precubierta respectivamente y, a continuación, registre sus posiciones. Se recomienda medir cada estándar y muestra al menos por duplicado.

· 2. Agregue 100 µL de cada estándar, control y muestra en los pozos apropiados. Selle la placa con una tapa e incube durante 1 hora a 37°C.

· 3. Retire la tapa y deseche el líquido.

· 4. Añada 100 µl de la solución de trabajo del Reactivo A de detección a cada pocillo. Selle la placa con una tapa e incube durante 1 hora a 37°C.

· 5. Retire la tapa y deseche la solución. Lave la placa 3 veces con tampón de lavado 1X.

· 6. Agregue 100 µL de la solución de trabajo del Reactivo de Detección B en cada pozo, selle e incube a 37°C por 30 min.

· 7. Desechar la solución y lavar la placa 5 veces con tampón de lavado como se explica en el paso anterior.

· 8. Alícuota de 90 µl de sustrato TMB en cada pocillo. Selle la placa con una tapa e incube a 37°C durante 10-20 min. Evite la exposición a la luz. El tiempo de incubación es solo para uso de referencia, el usuario final debe determinar el tiempo óptimo. No exceda los 30 min.

· 9. Agregue 50 µL de solución de parada a cada pocillo. Leer a 450 nm inmediatamente.

Cálculo de resultados

Para el cálculo, promedie las lecturas duplicadas de OD450 para cada estándar de referencia y cada muestra y reste la lectura promedio de OD450 del control (cero). La curva estándar se puede trazar como la DO450 relativa de cada solución estándar de referencia (Y) frente a la concentración respectiva de cada solución estándar (X). La concentración de vitamina B12 de las muestras se puede interpolar a partir de la curva estándar.

Disponibilidad

Enviado dentro de 5-12 días hábiles.

Nota

Este producto es solo para uso de investigación.

El rango y la sensibilidad están sujetos a cambios. Póngase en contacto con nosotros para obtener la información más reciente del producto. Para obtener resultados precisos, las concentraciones de la muestra deben diluirse al rango medio del kit. Si necesita un rango específico, contáctenos con anticipación o escriba su solicitud en los comentarios de su pedido.

Tenga en cuenta que nuestros kits ELISA y CLIA están optimizados para la detección de muestras nativas, en lugar de proteínas recombinantes. No podemos garantizar la detección de proteínas recombinantes, ya que pueden tener secuencias o estructuras terciarias diferentes a la proteína nativa.

Placa recubierta de

Antígeno