Introduction

La vitamine B12 (cobalamine) est une vitamine hydrosoluble produite par des bactéries et des archées. Il est utilisé par toutes les cellules humaines métabolisantes pour la synthèse de l'ADN, le métabolisme des acides gras et le métabolisme des acides aminés. La vitamine se compose d'un anneau de corrine modifié avec un ion cobalt central. Une carence en vitamine B12 entraîne fatigue, anémie et troubles neurologiques.

Cible

Vitamine B12 (cyanocobalamine)

Réactivité

Général (toutes les espèces)

Applications testées

ELISA

Dilutions recommandées

Les dilutions/concentrations optimales doivent être déterminées par l'utilisateur final.

Stockage

Expédié à 4 °C. Dès réception, stocker le kit conformément aux instructions de stockage du manuel du kit.

Validité

La validité de ce kit est de 6 mois.

La stabilité

La stabilité du kit est déterminée par le taux de perte d'activité. Le taux de perte est inférieur à 5% avant la date de péremption dans des conditions de stockage appropriées. Pour minimiser les fluctuations de performances, les procédures de fonctionnement et les conditions de laboratoire doivent être strictement contrôlées. Il est également fortement suggéré que l'ensemble du test soit effectué par le même utilisateur tout au long.

Plage d'essai

0,156 ng/ml – 10 ng/ml

Forme standard

Lyophilisé

Méthode de détection

Colorimétrique

Données d'analyse

Quantitatif

Échantillon type

Sérum, plasma, homogénats de tissus et autres fluides biologiques.

Principe du dosage

Ce kit est basé sur la technologie de dosage immuno-enzymatique sandwich. Un anticorps est pré-enduit sur une plaque à 96 puits. Les étalons, les échantillons de test et le réactif conjugué à la biotine sont ajoutés aux puits et incubés. Le réactif conjugué à la HRP est ensuite ajouté et la plaque entière est incubée. Les conjugués non liés sont éliminés à l'aide d'un tampon de lavage à chaque étape. Le substrat TMB est utilisé pour quantifier la réaction enzymatique HRP. Une fois le substrat TMB ajouté, seuls les puits contenant suffisamment de vitamine B12 produiront un produit de couleur bleue, qui passera ensuite au jaune après l'ajout de la solution d'arrêt acide. L'intensité de la couleur jaune est proportionnelle à la quantité de vitamine B12 liée sur la plaque. La Densité Optique (DO) est mesurée par spectrophotométrie à 450 nm dans un lecteur de microplaques, à partir de laquelle la concentration en Vitamine B12 peut être calculée.

Composants du kit

Les composants du kit répertoriés sont à titre indicatif uniquement. Le manuel du produit peut différer légèrement. Le produit doit être utilisé comme indiqué sur le manuel du produit inclus et livré avec le produit.

· Microplaque 96 puits pré-enduite

· Standard

· Tampon de diluant standard

· Tampon de lavage

· Réactif de détection A

· Réactif de détection B

· Diluant A

· Diluant B

· Substrat TMB

· Solution d'arrêt

· Scelleuse de plaques

Matériel requis mais non fourni

· Incubateur 37°C

· Pipettes multi et monocanal et pointes de pipettes stériles

· Flacon gicleur ou laveur de microplaques automatisé

· Tubes de 1,5 ml

· Eau distillée

· Papiers filtres absorbants

· Eprouvettes graduées de 100 ml et 1 litre

· Lecteur de microplaques (longueur d'onde : 450 nm)

· Agitateur ELISA

Préparation des réactifs

Cette procédure est fournie à titre indicatif. Le manuel du produit peut différer légèrement. Le produit doit être utilisé comme indiqué sur le manuel du produit inclus et livré avec le produit.

· 1) Étalon : Préparez l'étalon avec le volume recommandé de tampon diluant étalon, pour préparer la solution étalon. Utilisez ensuite le tampon Standard Diluent pour effectuer des dilutions en série de la solution standard, comme indiqué dans le protocole.

· 2) Tampon de lavage : Diluer le tampon de lavage concentré avec de l'eau distillée, comme indiqué dans le protocole.

· 3) Préparation du réactif de détection : Calculer le volume total de solution de travail nécessaire. Diluer le réactif de détection A et le réactif de détection B avec le diluant A et le diluant B, respectivement, à 1:100.

Procédure de dosage

Cette procédure est fournie à titre indicatif. Le manuel du produit peut différer légèrement. Le produit doit être utilisé comme indiqué sur le manuel du produit inclus et livré avec le produit.

· 1) Définir la norme, tester les échantillons et contrôler les puits.

· 2) Aliquoter 100 µl de standard dilué dans les puits standard.

· 3) Aliquoter 100 µl de tampon de diluant standard dans le puits de contrôle (zéro).

· 4) Aliquotez 100 µl d'échantillons dilués dans les puits d'échantillons. Incuber pendant 1 h à 37 ° C.

· 5) Aliquoter 100 µl de réactif de détection A dans chaque puits. Incuber pendant 1 h à 37 ° C.

· 6) Laver 3 fois.

· 7) Aliquoter 100 µl de réactif de détection B dans chaque puits. Incuber 30 min à 37°C.

· 8) Laver 5 fois.

· 9) Aliquoter 90 µl de Substrat TMB dans chaque puits. Incuber pendant 10-20 minutes à 37 ° C.

· 10) Aliquoter 50 µl de solution d'arrêt.

· 11) Mesurer la DO à 450 nm.

Protocole

Cette procédure est fournie à titre indicatif. Le manuel du produit peut différer légèrement. Le produit doit être utilisé comme indiqué sur le manuel du produit inclus et livré avec le produit.

· Équilibrer les composants du kit et les échantillons à température ambiante (18 – 25 °C) avant utilisation. Il est recommandé de tracer une courbe standard pour chaque test.

· 1. Placer respectivement les puits standard, d'échantillon de test et de contrôle (zéro) sur la plaque pré-enduite, puis enregistrer leurs positions. Il est recommandé de mesurer chaque étalon et échantillon au moins en double.

· 2. Ajouter 100 µL de chaque étalon, contrôle et échantillon dans les puits appropriés. Sceller la plaque avec un couvercle et incuber pendant 1 h à 37°C.

· 3. Retirez le couvercle et jetez le liquide.

· 4. Ajouter 100 µl de la solution de travail du réactif de détection A dans chaque puits. Sceller la plaque avec un couvercle et incuber pendant 1 h à 37°C.

· 5. Retirez le couvercle et jetez la solution. Laver la plaque 3 fois avec le tampon de lavage 1X.

· 6. Ajouter 100 µL de solution de travail du réactif de détection B dans chaque puits, sceller et incuber à 37°C pendant 30 min.

· 7. Jetez la solution et lavez la plaque 5 fois avec le tampon de lavage comme expliqué à l'étape précédente.

· 8. Aliquoter 90 µl de Substrat TMB dans chaque puits. Sceller la plaque avec un couvercle et incuber à 37°C pendant 10-20 min. Éviter l'exposition à la lumière. Le temps d'incubation est à titre de référence uniquement, le temps optimal doit être déterminé par l'utilisateur final. Ne pas dépasser 30 min.

· 9. Ajouter 50 µL de solution d'arrêt dans chaque puits. Lire à 450 nm immédiatement.

Calcul des résultats

Pour le calcul, faites la moyenne des lectures en double de la DO450 pour chaque étalon de référence et chaque échantillon et soustrayez la lecture moyenne du contrôle (zéro) de la DO450. La courbe standard peut être tracée comme la DO450 relative de chaque solution standard de référence (Y) par rapport à la concentration respective de chaque solution standard (X). La concentration en vitamine B12 des échantillons peut être interpolée à partir de la courbe standard.

Disponibilité

Expédié sous 5 à 12 jours ouvrés.

Note

Ce produit est destiné à la recherche uniquement.

La portée et la sensibilité sont susceptibles de changer. Veuillez nous contacter pour obtenir les dernières informations sur les produits. Pour des résultats précis, les concentrations d'échantillon doivent être diluées au milieu de la gamme du kit. Si vous avez besoin d'une gamme spécifique, veuillez nous contacter à l'avance ou écrivez votre demande dans les commentaires de votre commande.

Veuillez noter que nos kits ELISA et CLIA sont optimisés pour la détection d'échantillons natifs, plutôt que de protéines recombinantes. Nous ne pouvons pas garantir la détection des protéines recombinantes, car elles peuvent avoir des séquences ou des structures tertiaires différentes de la protéine native.

Plaque recouverte de

Antigène