مقدمة

فيتامين ب 12 (كوبالامين) هو فيتامين قابل للذوبان في الماء تنتجه البكتيريا والعتائق. يتم استخدامه من قبل جميع الخلايا البشرية في عملية التمثيل الغذائي لتخليق الحمض النووي ، وأيض الأحماض الدهنية ، وأيض الأحماض الأمينية. يتكون الفيتامين من حلقة كورن معدلة مع أيون كوبالت مركزي. يؤدي نقص فيتامين ب 12 إلى التعب وفقر الدم والاضطرابات العصبية.

هدف

فيتامين ب 12 (سيانوكوبالامين)

التفاعلية

عام (جميع الأنواع)

التطبيقات المختبرة

إليسا

التخفيفات الموصى بها

يجب أن يحدد المستخدم النهائي التخفيفات / التركيزات المثلى.

تخزين

يتم شحنها عند 4 درجات مئوية. عند الاستلام ، قم بتخزين المجموعة وفقًا لتعليمات التخزين في دليل المجموعة.

صلاحية

صلاحية هذه المجموعة 6 أشهر.

استقرار

يتم تحديد ثبات المجموعة من خلال معدل فقدان النشاط. معدل الخسارة أقل من 5% خلال تاريخ انتهاء الصلاحية في ظل ظروف التخزين المناسبة. لتقليل تقلبات الأداء ، يجب مراقبة إجراءات التشغيل وظروف المختبر بصرامة. يُقترح أيضًا بشدة أن يتم إجراء الفحص بالكامل بواسطة نفس المستخدم طوال الوقت.

نطاق الاختبار

0.156 نانوغرام / مل - 10 نانوغرام / مل

النموذج القياسي

مجففة بالتبريد

طريقة الكشف

قياس الألوان

بيانات الفحص

كمي

نوع العينة

المصل والبلازما ومتجانسات الأنسجة والسوائل البيولوجية الأخرى.

مبدأ الفحص

تعتمد هذه المجموعة على تقنية فحص المواد الماصة المناعية المرتبطة بإنزيم السندويتش. يتم طلاء الجسم المضاد مسبقًا على لوحة 96 بئر. تضاف المعايير وعينات الاختبار والكاشف المترافق مع البيوتين إلى الآبار وتحضينها. ثم يتم إضافة كاشف HRP المترافق ، ويتم تحضين اللوحة بأكملها. تتم إزالة الاتحادات غير المقيدة باستخدام محلول الغسيل في كل مرحلة. تُستخدم ركيزة TMB لتحديد التفاعل الأنزيمي لـ HRP. بعد إضافة ركيزة TMB ، فقط الآبار التي تحتوي على كمية كافية من فيتامين B12 ستنتج منتجًا أزرق اللون ، والذي يتحول بعد ذلك إلى اللون الأصفر بعد إضافة محلول التوقف الحمضي. تتناسب شدة اللون الأصفر مع كمية فيتامين ب 12 الموجودة على الطبق. يتم قياس الكثافة البصرية (OD) قياسًا طيفيًا عند 450 نانومتر في قارئ الصفيحة الدقيقة ، والتي يمكن من خلالها حساب تركيز فيتامين ب 12.

مكونات الطقم

مكونات المجموعة المذكورة هي للإشارة فقط. قد يختلف دليل المنتج قليلاً. يجب استخدام المنتج كما هو مذكور في دليل المنتج المرفق والتسليم مع المنتج.

· صفيحة ميكروية 96 بئر مطلية مسبقًا

· معيار

· عازلة مخففة قياسية

· غسل العازلة

· كاشف الكشف أ

· كاشف الكاشف ب

· مخفف أ

· مخفف ب

الركيزة TMB

· وقف الحل

· صفيحة السدادة

المواد مطلوبة ولكنها غير متوفرة

· حاضنة 37 درجة مئوية

· ماصات أحادية القناة ومتعددة وأطراف ماصة معقمة

· زجاجة بخاخة أو غسالة أوتوماتيكية للصفائح الدقيقة

· أنابيب سعة 1.5 مل

· ماء مقطرة

· أوراق ترشيح ماصة

· أسطوانات مدرجة سعة 100 مل و 1 لتر

· قارئ لوحة ميكروسكوبية (الطول الموجي: 450 نانومتر)

· إليسا شاكر

تحضير الكاشف

يتم توفير هذا الإجراء كمرجع فقط. قد يختلف دليل المنتج قليلاً. يجب استخدام المنتج كما هو مذكور في دليل المنتج المرفق والتسليم مع المنتج.

· 1) المعيار: قم بإعداد المعيار بالحجم الموصى به للمخزن المعياري المخفف القياسي ، لعمل الحل القياسي. ثم استخدم المخزن المؤقت القياسي المخفف لتنفيذ التخفيفات التسلسلية للمحلول القياسي ، وفقًا للتعليمات الواردة في البروتوكول.

· 2) عازلة الغسيل: قم بتخفيف المخزن المؤقت للغسيل المركز بالماء المقطر ، وفقًا للتعليمات الواردة في البروتوكول.

3) تحضير كاشف الكشف: احسب الحجم الإجمالي لمحلول العمل المطلوب. كاشف الكشف المخفف أ وكاشف الكشف ب مع المخفف أ والمخفف ب ، على التوالي ، عند 1: 100.

إجراء الفحص

يتم توفير هذا الإجراء كمرجع فقط. قد يختلف دليل المنتج قليلاً. يجب استخدام المنتج كما هو مذكور في دليل المنتج المرفق والتسليم مع المنتج.

· 1) تعيين المعايير وعينات الاختبار وآبار التحكم.

2) قسمة 100 ميكرولتر من المعيار المخفف في الآبار القياسية.

3) قسمة 100 ميكرولتر من المخزن المعياري المخفف المعياري للتحكم في البئر (صفر).

· 4) قسمة 100 ميكرولتر من العينات المخففة في آبار العينة. احتضان لمدة 1 ساعة عند 37 درجة مئوية.

· 5) قسمة 100 ميكرولتر من كاشف الكشف A لكل بئر. احتضان لمدة 1 ساعة عند 37 درجة مئوية.

· 6) اغسل 3 مرات.

· 7) قسمة 100 ميكرولتر من كاشف الكشف B لكل بئر. احتضان لمدة 30 دقيقة عند 37 درجة مئوية.

· 8) اغسل 5 مرات.

9) قسمة 90 ميكرولتر من ركيزة TMB لكل بئر. احتضان لمدة 10-20 دقيقة عند 37 درجة مئوية.

· 10) قسمة 50 ميكرولتر من محلول الإيقاف.

· 11) قياس OD عند 450 نانومتر.

بروتوكول

يتم توفير هذا الإجراء كمرجع فقط. قد يختلف دليل المنتج قليلاً. يجب استخدام المنتج كما هو مذكور في دليل المنتج المرفق والتسليم مع المنتج.

· قم بموازنة مكونات المجموعة والعينات مع درجة حرارة الغرفة (18-25 درجة مئوية) قبل الاستخدام. يوصى برسم منحنى قياسي لكل اختبار.

1. ضع الآبار المعيارية وعينة الاختبار والتحكم (صفر) على الصفيحة المطلية مسبقًا على التوالي ، ثم قم بتسجيل مواضعها. يوصى بقياس كل معيار وعينة على الأقل في نسختين.

2. أضف 100 ميكرولتر من كل معيار ، وقم بالتحكم وعينة في الآبار المناسبة. ختم اللوحة بغطاء واحتضانها لمدة 1 ساعة عند 37 درجة مئوية.

3. انزع الغطاء وتخلص من السائل.

4. أضف 100 ميكرولتر من كاشف الكشف محلول عملي لكل بئر. ختم اللوحة بغطاء واحتضانها لمدة 1 ساعة عند 37 درجة مئوية.

5. قم بإزالة الغطاء وتجاهل المحلول. اغسل اللوحة 3 مرات باستخدام 1X Wash Buffer.

6. أضف 100 ميكرولتر من محلول كاشف الكاشف B في كل بئر ، وختمه واحتضنه عند 37 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة.

7. تخلص من المحلول واغسل اللوحة 5 مرات باستخدام محلول الغسيل كما هو موضح في الخطوة السابقة.

8. قسمة 90 ميكرولتر من ركيزة TMB في كل بئر. ختم اللوحة بغطاء واحتضانها عند 37 درجة مئوية لمدة 10-20 دقيقة. تجنب التعرض للضوء. وقت الحضانة هو للاستخدام المرجعي فقط ، يجب تحديد الوقت الأمثل من قبل المستخدم النهائي. لا تتجاوز 30 دقيقة.

9. أضف 50 ميكرولتر من محلول الإيقاف لكل بئر. اقرأ على الفور عند 450 نانومتر.

حساب النتائج

للحساب ، متوسط القراءات المكررة OD450 لكل معيار مرجعي وكل عينة واستبدال متوسط التحكم (صفر) قراءة OD450. يمكن رسم المنحنى القياسي على أنه OD450 النسبي لكل محلول معياري مرجعي (Y) مقابل التركيز الخاص بكل محلول قياسي (X). يمكن استيفاء تركيز عينات فيتامين ب 12 من المنحنى القياسي.

التوفر

يتم شحنها في غضون 5-12 يوم عمل.

ملحوظة

هذا المنتج للاستخدام البحثي فقط.

النطاق والحساسية عرضة للتغيير. يرجى الاتصال بنا للحصول على أحدث معلومات المنتج. للحصول على نتائج دقيقة ، يجب تخفيف تركيزات العينة إلى النطاق المتوسط للمجموعة. إذا كنت تحتاج إلى نطاق معين ، يرجى الاتصال بنا مقدمًا أو كتابة طلبك في تعليقات طلبك.

يرجى ملاحظة أن مجموعات ELISA و CLIA الخاصة بنا تم تحسينها للكشف عن العينات الأصلية ، بدلاً من البروتينات المؤتلفة. نحن غير قادرين على ضمان الكشف عن البروتينات المؤتلفة ، حيث قد يكون لها تسلسلات مختلفة أو هياكل من الدرجة الثالثة للبروتين الأصلي.

لوحة مطلية

مولد المضاد